Социально-методический центр поддержки СО НКО Московской области

не привела к смерти по истечении указанного времени инкубации, но воздействие все еще может быть неблагоприятным. Таким образом, ожидается, что применение с более низкими концентрациями для борьбы с улитками позволит избежать такой опасности. Обычные пестициды, особенно карбаматы, широко и успешно используются в Египте, а также во многих других странах в качестве спреев или приманок для борьбы с вредителями (Miller et al., 1988; Heiba ​​et al., 2002). Метомил — это монометилкарбаматный инсектицид, используемый для борьбы с вредителями ряда пищевых культур, хлопка и табака во многих частях мира (Kidd and James, 1991).

Активность ацетилхолинэстеразы обычно используется в качестве биомаркера воздействия различных классов загрязнителей, таких как фосфорорганические и карбаматные пестициды (Grue et al., 1997). Низкие концентрации инсектицидов могут ингибировать AChE и, таким образом, вызывать избыточное накопление ацетилхолина в синапсах и нервно-мышечных соединениях (Varo et al., 2008; Laguerre et al., 2009; Xuereb et al., 2009; Rakhi et al., 2013). Гепатопанкреас является ключевым органом метаболизма и обеспечивает функции, которые у млекопитающих выполняются отдельно печенью и поджелудочной железой, включая производство пищеварительных ферментов и всасывание переваренной пищи, всасывание питательных веществ, эндоцитоз пищевых веществ, хранение пищи и т. Д. экстракция (Wang et al., 2014). Токсиканты переносятся гемоцитами в гепатопанкреас разными путями.

Повреждение печени, метаболического центра детоксикации химических веществ, подтверждается изменениями активности аспартатаминотрансферазы (AST), аланинаминотрансферазы (ALT), лактатдегидрогеназы (LDH) и щелочной фосфатазы (ALP). Активность таких маркеров была определена для индикации метаболических изменений под действием стресса. Изменения уровней этих ферментов в сыворотке на самом деле являются наиболее значимым сигналом токсичности для печени.

Одним из наиболее важных последствий действия инсектицида, по-видимому, является способность вызывать повреждение ДНК. За последние десятилетия был достигнут фундаментальный прогресс в оценке воздействия физических и химических генотоксинов на водные и наземные экосистемы (Jha, 2004; Vasseur and Bonnard, 2014). Разработка новых методов и применение более чувствительных биоактивных веществ при обнаружении генотоксичности различных ксенобиотиков в наземной биоте были основными определяющими факторами для достижения этих достижений (Song et al., 2012; Добжинска и др., 2014). Вследствие структурных изменений ДНК могут возникать различные хромосомные аберрации. Более того, может существовать кластогенное воздействие загрязнителей окружающей среды, аневгенные эффекты (количественные изменения в хромосомных наборах организмов) (De Flora et al., 1994).

Следовательно, эффекты, вызванные загрязнителями окружающей среды, чаще всего проявляются сначала на молекулярном уровне, и как следствие таких проблем могут происходить различные цитологические, морфологические, физиологические и другие изменения.Генотоксичность коммерческих препаратов метомила описана в некоторых отчетах (Blevins et al., 1977; Sun et al., 2010), но, к сожалению, результаты этих исследований не являются окончательными.

Микроядерный тест — один из наиболее распространенных и многообещающих подходов в исследованиях генотоксичности окружающей среды; он служил показателем цитогенетического повреждения более 30 лет (Barssiene et al., 2008). В настоящее время анализ признан одним из самых успешных и надежных тестов на генотоксические канцерогены, т.е.е. канцерогены, которые действуют, вызывая генетические повреждения. Остлинг и Йохансон (1984) представили микрогелевый электрофорез как оригинальный метод измерения ДНК

однонитевых разрывов, вызывающих релаксацию суперспиралей ДНК. Этот метод был изменен Singh et al. (1988). Другая модификация оригинального метода Остлинга и Йохансона была представлена ​​и названа «анализ комет» после появления ДНК отдельной клетки (Olive, 1989).

При обзоре литературы, проведенной по наземным улиткам в Египте, насколько можно установить, большинство исследований было сосредоточено на обнаружении острой токсичности пестицидов, но не учитывались физиологические изменения их сублетальных концентраций.Таким образом, учитывая скудность информации и отсутствие сообщений о биотоксических эффектах метомила, настоящее исследование было направлено на изучение того, вызывает ли ланнат ингибирование AChE, изменение активности ферментов сыворотки (AST, ALT, ALP и LDH) и повреждение ДНК (MN и частота BN) у E. vermiculata, местно подвергавшихся действию инсектицида в различных концентрациях в течение 4 и 14 дней (острая и сублетальная обработка, соответственно).

Материалы и методы

Химическая промышленность

Коммерческий состав метомил (S-метил N- (метилкарбамоилокси) тиоацетимидат; CAS 16752-77-5), 90% водорастворимый порошок (SP) активного ингредиента Lannate®, был получен от Du Pont, США.Все другие химические вещества и реагенты, использованные в этом исследовании, были высшей степени чистоты и были приобретены у Al Gomhoria Pharm. Ind., Каир, Египет.

Сбор и уход за улитками

Гомогенная популяция E. vermiculata была собрана летом 2014 года в питомнике необработанных декоративных растений, расположенном недалеко от города Бельбейс (30 ° 25 ‘северной широты, 31 ° 34’ восточной долготы), мухафаза Шаркия, Египет. сделано вручную. Собранные улитки (24.5 ± 0,46 мм длиной скорлупы и 2,74 ± 0,22 г массы тела) были перенесены в полиэтиленовых пакетах в лабораторию и содержались в лабораторных условиях в пластиковых ящиках (40 x 30 x 10 см) с 3-сантиметровым слоем увлажненной почвы на дне. . Они были идентифицированы согласно ключу, данному Годаном (1983). Животных кормили листьями салата ad libitum, и корм обновляли через день. Перед началом экспериментов улиток акклиматизировали в течение десяти дней к лабораторным условиям (22 ± 2 ° С и свето-темноте 12:12 ч).

Анализ острой токсичности

Эксперименты проводились в пластиковых ящиках объемом 1000 мл, содержащих на дне 3-сантиметровый слой влажной почвы в тех же условиях, что и ранее в период акклиматизации. Предварительные эксперименты были проведены, чтобы установить эффективный диапазон тестируемых химикатов. Среднюю дозу (48 ч LD50) ланната против улиток E. vermiculata оценивали в шести тест-системах с различными дозами ланната с использованием теста контактной токсичности (метод местного применения), как описано Al-Sarar et al.(2012). Определенные проверенные концентрации ланната составляли 1, 5, 10, 15 и 20 мг / мл. Соответствующая доза для каждой концентрации составляла 25, 125, 250, 375

и 500 мкг улитка-1. Исследуемые дозы осторожно вводили один раз на поверхность тела улитки внутри раковины с помощью микропипетки Eppendorf, содержащей 25 мкл. Для каждой обработки использовали 30 улиток, которые содержали в трех пластиковых ящиках (по 10 животных в каждой). Во время эксперимента улитки не получали пищи.Ящики были закрыты тканевой сеткой, закрепленной резиновыми лентами, чтобы улитки не убегали. Ежедневно в каждую коробку добавляли несколько миллиметров воды, чтобы обеспечить подходящую влажность для жизнедеятельности улиток. Улиток, использованных в качестве контроля, обрабатывали дистиллированной водой. Процент смертности регистрировали через 48 часов после начала эксперимента. Критериями смерти были отсутствие извлечения мягких частей внутрь панциря и отсутствие реакции на легкие толчки.

Анализ сублетальной токсичности

Улиток разделили на четыре группы по 45 животных в каждой (каждая коробка содержала 15 улиток).Группа I: животные этой группы не получали лечения и считались контролем. Группа II: животные этой группы получали однократную дозу 25 мкл (5,33 мкг улитки-1) ланната (самый низкий уровень наблюдаемых побочных эффектов, LOAEL). Группа III: улитки этой группы получили однократную дозу 25 мкл (21,32 мкг улитки-1) ланната (в 4 раза выше, чем LOAEL: ~ 20% от 48-часовой LD50). Группа IV: улитки этой группы получали однократную дозу 25 мкл (53,30 мкг улитки-1) ланната (в 10 раз выше, чем LOAEL: ~ 50% 48-часовой LD50).Эксперимент продолжался 2 недели. Сублетальные дозы применялись местно путем инъекции внутрь полости скорлупы.

Забор гемоцитов и подготовка тканей

образцов гемолимфы у выживших улиток было собрано в соответствии с методом Itziou and Dimitriadis (2011). Небольшая часть раковины улитки, расположенная над сердцем, была удалена, и гемолимфа шести животных из каждой экспериментальной группы была собрана из полости сердца улитки с помощью стерилизованного шприца, объединена и помещена в пластиковые пробирки.Гемолимфу центрифугировали в течение 20 минут при 3000 g при 4 ° C, затем гемоциты ресуспендировали в физиологическом солевом буфере (Itziou and Dimitriadis, 2011) и использовали в тесте на микроядер. Затем раковины указанных выше улиток каждой экспериментальной группы полностью удаляли для доступа к внутренним органам. Гепатопанкреас и область голова-стопа шести случайно выбранных улиток (по 2 улитки из каждой коробки) иссекали острыми ножницами, а ганглии буккального образования иссекались и удалялись под бинокулярным микроскопом.Ганглии и мышцы стопы объединяли и гомогенизировали в 10 В (вес / объем) 0,1 М фосфатного буфера (pH 7,4). Затем гомогенаты центрифугировали при 4000 g в течение 30 мин. Аликвоты гепатопанкреатической ткани измельчали ​​на мелкие кусочки и переносили в колбу, содержащую 15 мл диссоциирующих растворов (0,01% коллагеназы типа CLS IV, 175 мкг-1) в CMFS с последующим осторожным перемешиванием в течение 60 мин при 15 ° C и фильтрованием через 250 ° C. мм — затем нейлоновые фильтры диаметром 60 мм.

Ферментативные измерения

Ацетилхолинэстераза (AChE: EC: 3.1.1.7) активность измеряли в церебральных ганглиях и гемолимфе с использованием 5,5′-дитио-бис-2-нитробензойной кислоты (DTNB) и йодистого ацетилтиохолина в качестве субстрата согласно Ellman et al. (1961). Активность AChE выражали в нмоль мг-1 белка мин-1. Определение

активности ферментов аспартатаминотрансферазы (AST), аланинаминотрансферазы (ALT), щелочной фосфатазы (ALP) и лактатдегидрогеназы (LDH) были оценены с помощью имеющихся в продаже диагностических наборов, поставляемых Spectrum Diagnosis, Египет.Активность фермента выражали в международных единицах на литр (1 ЕД / л).

Измерение общего белка

Общий белок гемолимфы и супернатант мышечной ткани и ганглиев определяли по методу Брэдфорда (1976), используя бычий сывороточный альбумин в качестве стандарта. Вкратце, реагент Брэдфорда разбавляли в 5 раз дистиллированной водой (1 часть Брэдфорда: 4 части дистиллированной воды), фильтровали через бумагу Whatman 540 и хранили при 4 ° C. 10-20 мкл белкового экстракта добавляли к 1 мл разбавленного реагента и перемешивали.Образующийся синий цвет измеряли при 595 нм.

Анализ ядерных аномалий

Микроядерный тест проводили с гемоцитами улитки в соответствии с методологией Hooftman and de Raat (1982) и анализом ядерных аномалий гемоцитов в соответствии с Carrasco et al. (1990). Сразу после взятия пробы гемолимфу смазывали на чистых предметных стеклах, сушили в течение ночи, фиксировали метанолом в течение 10 мин и окрашивали Гимезой (5%). Всего 3000 гемоцитов на улитку исследовали под оптическим микроскопом (увеличение 1000x).Средние частоты микроядер (MN) и двухъядерных клеток (BN), обнаруженные в каждой экспериментальной группе, были рассчитаны и выражены на 1000 клеток (% е).

Статистический анализ

Результаты выражены как среднее ± стандартное отклонение. У нормальных организмов и организмов, подвергшихся воздействию, наблюдали различные параметры. Перед анализом было проверено предположение о нормальности данных и однородность дисперсии среди различных групп, и было обнаружено, что данные соответствуют двум вышеупомянутым предположениям.Уровень статистической значимости был установлен как p <0,05. Односторонний дисперсионный анализ ANOVA с последующим апостериорным тестом Бонферрони был проведен, чтобы найти значительную разницу в средних значениях, рассматривающих каждую конечную точку как зависимую переменную, а концентрацию как независимую переменную. Данные анализировали с использованием статистического программного обеспечения SPSS (версия 21, SPSS Inc., Чикаго, Иллинойс).

Результаты

Тесты на токсичность

Процент смертности от зараженных E.vermiculata в каждой группе концентрации становилась все выше по мере увеличения концентрации воздействия (таблица 1). Lannate убил 16,63%, 47,77% и 92,22% улиток, подвергшихся воздействию 25, 125 и 500 мкг улитки-1, соответственно. Пробит-анализ результатов показывает, что расчетное 48-часовое значение LD50 составляло 102,32 мкг улитки-1. В отношении всех видов острой и сублетальной токсичности во время экспериментов не наблюдалось смертности улиток контрольных групп.

Таблица 1 Значения смертности и параметры токсичности ланата после внесения в Eobania vermiculata в течение 48 часов.

Конц. (мг / л) Средний процент смертности ± стандартное отклонение

0 25 125 250 375 500 Коэффициент корреляции (R2) LD50 (мг / л) Уравнение регрессии 16,63 ± 6,65 47,77 ± 6,93 72,22 ± 6,94 82,22 ± 1,92 92,22 ± 8,39 0,967 102,32 (97,11-107,53) * Y = 1,7667x + 1,4353

Среднее значение на основе трех повторов ± стандартное отклонение, по два животных в каждой. 95% нижний и верхний реперные границы показаны в скобках.

Вариация активности АХЭ

Активность АХЭ в церебральных ганглиях и мышцах стопы неэкспонированных E.vermiculata был почти таким же. Активность АХЭ в церебральных ганглиях улиток, подвергшихся воздействию сублетальных доз ланата, достоверно (p <0,05) снизилась по сравнению с контролем. В церебральных ганглиях значения степени ингибирования AChE составляли 55,74%, 81,85% и 72,11% от контроля у улиток, получавших 5,33, 21,32 и 53,30 мкг улитки-1, соответственно, в течение 14 дней. Соответствующие значения в процентах от контроля для мышц стопы составили 28,94, 42,39 и 54,00 (рис. 1).

Биохимические показатели гемолимфы

Фиг.2 показаны уровни ферментов гемолимфы E. ver-miculata, обработанных сублетальными дозами ланната. Когда улиток подвергали воздействию сублетальных доз ланната, наблюдалась значительная (p <0,05) индукция активности AST, ALT и LDH. Напротив, были обнаружены существенные различия в активности ЩФ. Не наблюдалось существенной разницы между активностью AST улитки, подвергшейся воздействию 5,53 мкг улитки-1, и активностью контроля. Индукционный АСТ

Контроль 5.53 21,32 53,3

доз (нг улитки-1) Мозг 0 Мышца

Рис. 1. Активность AChE в тканях мозга и мышц E. vermiculata, подвергшихся воздействию сублетальных доз ланата или только воды (контроль). Столбцы представляют собой средние значения, а вертикальные линии — стандартное отклонение (n = 6). Значительно отличается от соответствующего контроля. Разные буквы указывают на статистически значимые различия (p <0,05).

AST ALT ALP LDH

□ 0 с 5.53 ил 21,32 153,3

Рис. 2 Активность ферментов гемолимфы (AST, ALT, ALP и LDH) у E. vermiculata, подвергшихся воздействию сублетальных доз ланата или только воды (контроль). Столбцы представляют собой средние значения, а вертикальные линии — стандартное отклонение (n = 6). Разные буквы указывают на статистически значимые различия (p <0,05).

составляли 226% и 264% контроля у улиток, обработанных 21,32 и 53,30 мкг улитки-1, соответственно. Активность АЛТ значительно увеличилась у улиток, получавших все испытанные сублетальные дозы, по сравнению с контролем.Увеличение активности было дозозависимым. Активность ЩФ подавлялась в гемолимфе при всех испытанных сублетальных дозах, и подавление не было дозозависимым. Улитки, которым вводили сублетальные дозы ланната, также показали значительное увеличение активности ЛДГ по сравнению с контролем. Хотя между группами были некоторые статистические различия, они не следовали очевидной тенденции, и дозозависимые изменения не были обнаружены. В конце 14 дней наблюдалось достоверное (p <0,05) снижение общего белка гемолимфы для трех обработанных групп по сравнению с контролем (рис.3).

Частота образования МН и БН

Результаты анализа MN и BN показаны на рис. 4. Частота MN у улиток, получавших ланнат, увеличилась в

Контроль 5,35 21,32 53,3

доз (джиг улитка-1)

Рис. 3. Общий белок в свежей ткани E. vermiculata, подвергшейся воздействию сублетальных доз ланата или только воды (контроль). Столбцы представляют собой средние значения, а вертикальные линии — стандартное отклонение (n = 6).Значительно отличается от соответствующего контроля. Разные буквы указывают на статистически значимые различия (p <0,05).

дозозависимым образом. Кроме того, частоты MN во всех группах лечения ланнатом непрерывно увеличивались до окончания эксперимента. Частоты образования MN были в ~ 3, 4 и 6 раз выше, чем в контроле у ​​улитки, подвергшейся воздействию 5,53, 21,32 и 53,30 мкг улитки-1, соответственно. Частота БН в гемоцитах улиток, подвергшихся воздействию 5.53 мкг улитка-1 не показала какой-либо значимой (p <0,05) разницы по сравнению с контролем. Частота BN достоверно (p <0,05) увеличивалась по сравнению с контролем в гемоцитах улиток, подвергшихся воздействию 21,32 и 53,30 мкг улитки-1.

Обсуждение

Данные настоящего исследования ясно указывают на то, что ланнат, коммерческий препарат метомила, оказывает смертельное воздействие на наземную улитку E. vermiculata. 48-часовая ЛД50 ланната для этой улитки составила 102.32 мкг улитки-1, что, очевидно, ниже, чем ЛД50 чистого метомила для наземной улитки Helix aspersa (240 мкг улитка-1) (Salama et al., 2005). Полученные результаты согласуются с данными Heiba ​​et al. (2002), которые обнаружили, что активность метомила против тестируемых улиток E. vermiculata и Monacha contiana была дозозависимой. Eshra (2014) показал, что метомил был наиболее токсичным соединением, когда его тестировали против Theba pisana, а затем гидроксида меди, но когда тестировали против E.vermiculata гидроксид меди оказался более токсичным, чем метомил. Сравнивая токсичность ланната с токсичностью метио-карбюратора, другого карбаматного инсектицида, широко используемого в Египте, Radwan et al. (2008) заявили, что ланнат проявлял большую эффективность, чем метиокарб, против E. vermiculata. Bonatti et al. (1994) сообщили, что технический состав карбаматного инсектицида ланната 25 был более активен, чем чистое соединение, по сравнению с аналогичными концентрациями активного начала. Более чем двадцатилетние экотоксикологические исследования AChE показали, что этот фермент является подходящим биомаркером для широкого круга водных и наземных организмов, которые подвергаются воздействию различных типов загрязнителей, включая инсектициды, и продолжает оставаться важным компонентом программ биомониторинга заражение инсектицидами.Одной из общих целей этой работы было изучение потенциального воздействия инсектицида ланната на ацетилхолинэстеразу

Рисунок 4 Средняя частота микроядер и двуядерных клеток в контрольной и обработанной группах наземной улитки E. vermiculata. Столбцы представляют собой средние значения, а вертикальные линии — стандартное отклонение (n = 6). Значительно отличается от соответствующего контроля. Разные буквы указывают на статистически значимые различия (p <0,05).

в наземной улитке, чтобы получить больше информации о ее нейротоксичности.Подчеркивалась необходимость понимания биомаркерных реакций наземных улиток (El-Shenawy et al., 2012). Карбаматы являются агонистами nAChR (Smulders et al., 2003) и не вызывают прямого ингибирования активности AChE, как показано для других пестицидов, таких как органофосфаты и неоникотиноиды. В этом исследовании значительное снижение активности AChE наблюдалось при сублетальных концентрациях всего 5,53 мкг улитки-1.

Ланнат, как и некоторые другие пестициды, может вызывать изменения в активности AST, ALT, ALP и LDH (Celik et al., 2009). Аминотрансферазы очень активны в печени, и их активность можно обнаружить в небольших количествах. Таким образом, они наиболее полезны при мониторинге воздействия таких пестицидов на людей (Lehninger et al., 1992). В настоящем исследовании значительные изменения активности АСТ и АЛТ у наземных улиток указывают на функциональное нарушение печени (Choudhary et al., 2003; Kalender et al., 2005; Kammon et al., 2010; Arfat et al., др., 2014). Однако возможно, что инсектицид ланнат, как токсикологический агент, как и другие пестициды, может взаимодействовать в первую очередь с мембранами клеток печени и мышечной ткани.Это приводит к повреждению структуры и изменению утечки ферментов и метаболизма компонентов. Таким образом, ланнат может повысить давление этого фермента в плазму в результате разрушения, вызванного утечкой фермента. Известно, что эти ферменты в основном локализованы в цитоплазме, и они будут секретироваться в кровь после гепатоцеллюлярного повреждения, что приведет к увеличению их уровней в сыворотке. Следовательно, это исследование может предполагать, что любое повреждение гепатопанкреатических клеток наземных улиток может привести к изменению уровней AST и ALT в сыворотке (гемолимфе).ЩФ представляет собой микросомальный фермент печени, который участвует в мембранном транспорте из-за его действия на ряд фосфо-моноэфиров биохимических соединений, таких как глюкоза (Edqvist et al., 1992). Снижение активности ЩФ может быть связано с падением биосинтеза гликогена, вызванным пониженными метаболическими потребностями и электролитическим неравновесием из-за гипергидратации тканей (Shaffi, 1979). Снижение ALP может отражать изменение массы эндоплазмы, которое, как известно, происходит в клеточной мембране (Edqvist et al., 1992), поскольку он также участвует в преобразовании энергетических соединений НАДФ в НАД (Morton, 1955). Следовательно, снижение активности ЩФ может привести к биосинтетическим сдвигам и метаболизму энергии в организме, подвергающемся воздействию (Ovuru and Mgbere, 2000). Результаты настоящего исследования согласуются с выводами Das and Mukherjee (2003) и Gabriel et al. (2011), но отличаются от результатов Аль-Аттара (2005) и Саманты и др. (2014).

Во время стресса организмам требуется больше энергии для детоксикации, биотрансформации и выведения токсичных веществ с целью минимизации токсических эффектов.Это достигается за счет использования углеводов, основного и непосредственного источника энергии (Umminger, 1977). Результаты настоящего исследования показывают, что воздействие сублетальных доз ланната может влиять на общий метаболизм белка. Истощение белковой фракции у улиток может быть связано с деградацией углеводов. Такие случаи свидетельствуют о нарушениях синтеза и обмена белков. Результаты согласуются с выводами Kumar et al. (2011) и Banaee et al. (2014).

Микроядерный тест выявляет хромосомные фрагменты или ацентрические хромосомы, которые не включаются в основное ядро ​​после митоза.Таким образом, для обнаружения MN необходимо, чтобы активно делящиеся популяции клеток прошли хотя бы один клеточный цикл (Udroiu, 2006). Частота спонтанного ЗН в гемоцитах, измеренная в этом исследовании, сопоставима с уровнем

, сообщенный Vincent-Hubert et al. (2011) в том же типе клеток. Этот феномен относительно высоких уровней контроля был также продемонстрирован другими исследованиями беспозвоночных с использованием различных методов обнаружения разрывов (Steinert, 1996). У брюхоногих моллюсков, помимо наличия микроядер, существуют различные типы ядерных аномалий в гемоцитах.Такие аномалии использовались многими авторами как индикаторы дисфункции клеток моллюсков. Возникновение двуядерных клеток является результатом подавления цитокинеза. Двухъядерные клетки с низкой заболеваемостью E. vermiculata во время лабораторного воздействия согласуются с выводами Venier и Zampieron (2005).

Заключение

Результаты настоящего исследования показывают, что метомилланнат вызывает острую токсичность, причем смертность улиток является наиболее чувствительной конечной точкой.Более того, это исследование показывает важность измерения набора ферментных биомаркеров, таких как AChE, AST, ALT и ALP, в различных тканях для точной оценки эффекта ланната на нецелевые виды, такие как наземные улитки. Активность АХЭ E. ver-miculata дозозависимо ингибируется карбамат-ланнатом. За исключением ЩФ, значительная индукция ферментов гемолимфы была обнаружена у улиток, подвергшихся воздействию испытанных сублетальных доз. Результаты настоящего исследования показывают, что анализ MN и BN является надежным индикатором наличия и воздействия генотоксичных материалов.Полезность микроядер в качестве важного биомаркера генотоксических событий, вызванных загрязнителями, в настоящее время становится критическим вопросом при оценке воздействия загрязнения окружающей среды.

Список литературы

Аль-Аттар А.М., 2005. Биохимические эффекты кратковременного воздействия кадмия на пресноводных рыб, Oreochromis niloticus. J. Biol. Sci. 5, 260-265.

Аль-Сарар, А., Хусейн, Х., Абобейкер, Ю., Байуми, А., 2012. Моллюскоцидная активность экстрактов метомила и карденолида из Calotropis procra и Adenium arabicum против наземной улитки Monacha cantiana.Molecules 17, 5310-5318. Арфат, Ю., Махмуд, Н., Тахир, М.Ю., Рашид, М., Анджум, С., Чжао, Ф., Ли, DJ, Сунь, Ю.Л., Ху, Л., Чжихао, К., Инь, К. ., Шан, П., Цянь, АР, 2014. Влияние имидаклоприда на гепатотоксичность и нефротоксичность у самцов мышей-альбиносов. Toxicol. Rep.1, 554-561. Banaee, M., Sureda, A., Fazel Zohiery, F., Hagi, B.N., Daniela, G.S., 2014. Изменения биохимических параметров пресноводных рыб Alburnus mossulensis, подвергшихся воздействию сублетальных концентраций фенпропатрина. Int.J. Aquat. Биол. 2, 58-68. Барсиене, Дж., Рыбаковас, А., Форлин, Л., Сивокене, Дж., 2008. Исследования экологической генотоксичности мидий и рыб из района Гетеборг в Северном море. Acta Zool. Литовский. 18, 240-247. Blevins, R.D., Lijinksy, W., Regan, J.D., 1977. Нитрозированные метилкарбаматные инсектициды: влияние на ДНК клеток человека. Мутат. Res. 44, 1-7.

Bonatti, S., Bolognesi, C., Degan, P., Abbondandolo, A., 1994. Генотоксические эффекты карбаматного инсектицида метомила.I. Исследования in vitro с чистым соединением и техническим составом «Ланнат 25». Environ. Мол. Мутаген. 23, 306-311. Bradford, M.M., 1976. Быстрый и чувствительный метод количественного определения количества белка в микрограммах, использующий принцип связывания белок-краситель. Анальный. Biochem. 72, 248-254. Карраско, К.Р., Тилбери, К.Л., Майерс, М.С., 1990. Оценка микронуклеуса рыб как биологического индикатора воздействия химических загрязняющих веществ in situ. Жестяная банка. J. Fish. Акват. Sci. 47, 21232136.

Челик, И., Йилмаз, З., Туркоглу, В., 2009. Гематотоксические и гепатотоксические эффекты дихлофоса при сублетальных дозах у крыс. Environ. Toxicol. 24, 128-132.

Чоудхари, Н., Шарма, М., Верма, П., Джоши, С.С., 2003. Гепатогенная и нефротоксичность у крыс, подвергшихся воздействию эндосульфана. J. Environ. Биол. 24, 305-308.

Дас, Б.К., Мукерджи, С.С., 2003. Токсичность циперметрина для молоди Labeo rohita: биохимические, ферментативные и гематологические последствия.Комп. Biochem. Physiol. 124С, 109-121.

Де Флорам, С., Бенничелли, К., Баньяско, М., 1994. Генотоксичность соединений ртути. Обзор. Мутат. Res. 317, 57-79.

Добжирнка, М.М., Гайовик, А., Радзиковска, Дж., Ланкофф, М.Д., Дусаинска, М., Крушевски, М., 2014. Генотоксичность наночастиц серебра и диоксида титана в клетках костного мозга крыс in vivo. Токсикология 315, 86-91.

Эдквист, Л.Е., Медей, А., Форсберг, М., 1992. Биохимические показатели крови беременных норок, получавших ПХБ и фракции ПХБ. Амбио 21, 577-581.

Эллман, Г.Л., Кортни, К.Д., Андрес, В., Фезерстон, Р.М., 1961. Новое быстрое колориметрическое определение активности ацетилхолинэстеразы. Biochem. Pharmacol. 7, 88-95.

Эль-Окда, M.M.K., 1983. Наземные улитки и слизни (Pulmonata), разрушающие Mollusca на декоративных плантациях в Александрии, Египет. В: Труды 5-й Арабской конференции по пестицидам, т.2. Университет Танта, стр. 369–378.

Эль-Шенави, Н.С., Мохаммадден, А., Хессенан Аль-Фахми, З., 2012. Использование ферментативной и неферментативной системы антиоксидантной защиты наземной улитки Eobania vermiculata в качестве биомаркеров загрязнения суши тяжелыми металлами. Ecotoxicol. Environ. Саф., 347-354

Эшра, Э.Х., 2014. Токсичность метомила, гидроксида меди и удобрения на основе мочевины на некоторых наземных улитках. Анна. Agric. Sci. 59, 281-284.

Габриэль Р., Lombardo, A., Arens, A., Miller, JC, Genovese, P., Kaeppel, C., Nowrouzi, A., Bartholomae, CC, Wang, J., Friedman, G., et al., 2011. Беспристрастный полногеномный анализ специфичности нуклеазы цинкового пальца. Nat. Biotechnol. 29, 816-823.

Годан, Д., 1983. Слизни-вредители и улитки, биология и борьба. Springer, Берлин, стр. 445.

Грю, С.Е., Гилберт, П.Л., Сили, М.Е., 1997. Нейрофизиологические и поведенческие изменения у нецелевых диких животных, подвергшихся воздействию фосфорорганических и карбаматных пестицидов: терморегуляция, потребление пищи и размножение.Являюсь. Zool. 37, 369-388.

Хамед, С.С., Абдельмегуид, Н.Э., Амина, Э., Эссави, А.Э., Радван, М.А., Хегази, А.Э., 2007. Гистологические и ультраструктурные изменения, вызванные двумя карбаматными моллюскицидами на пищеварительной железе Eobania vermiculata. J. Biol. Sci. 7, 1017-1037.

Хейба, Ф.Н., Аль-Шаркави, И.М., Аль-Батал, А.А., 2002. Влияние инсектицида, ланата, на наземных улиток, Eobania vermiculata и Monacha contiana, в лабораторных условиях.J. Biol. Sci. 2, 813.

Hooftman, N., de Raat, W.K., 1982. Индукция ядерных аномалий (микроядер) в эритроцитах периферической крови восточных грызунов Umbra pygmea с помощью этилметансульфоната. Мутат. Res. 104, 147–152.

Itziou, A., Dimitriadis, V.K., 2011. Интродукция наземной улитки Eobania vermiculata в качестве организма-биоиндикатора загрязнения суши с использованием набора биомаркеров. Sci. Общий. Environ. 409, 1181–1192.

Джа, А.Н., 2004. Генотоксикологические исследования водных организмов: обзор. Мутат. Res. 552, 1-17.

Kalender, S., Ogutcu, A., Utzunhisarcikli, M., Acikgoz, F., Durak, D., Ulusoy, Y., Kalender, Y., 2005. Диазинон-индуцированная гепатотоксичность и защитное действие виатамина E на некоторых биохимические показатели и изменения ультраструктуры. Токсикология 211, 197-206.

Каммон, А.М., Брар, Р.С., Банга, Х.С., Содхи, С., 2010. Патобиохимические исследования гепатотоксичности и нефротоксичности при воздействии хлорпирифоса и имидаклоприда у кур-несушек.Вет. Arch. 80, 663-672.

Кидд, Х., Джеймс, Д.Р., 1991. Справочник по агрохимикатам, третье изд. Королевское общество информационных служб химии, Кембридж, Англия.

Кумар, Н., Прабху, ПАД, Пал, А.К., Ремья, С., Аклакур, М., Рана, Р.С., Гупта, С., Раман, Р.П., Джадхао, С.Б., 2011. Антиоксидантные и иммуно-гематологические статус тилапии (Oreochromis mossambicus) во время теста на острую токсичность эндосульфана. Пестик. Biochem. Physiol. 99, 45-52.

Лагерр, К., Санчес-Эрнандес, Дж. К., Колер, Х. Р., Трибскорн, Р., Каповиц, Ю., Ро, М., Мацциа, К., 2009. Эстеразы типа B в улитке Xeropicta derbentina: энзимологический анализ для оценки их использования как биомаркеры воздействия пестицидов. Environ. Загрязнение. 157, 199-207.

Ленингер А.Л., Нельсон Д.Л., Кокс М.М., 1992. Принципы биохимии, второе изд. Издательство Worth Publishers, Нью-Йорк.

Миллер, Э., Суэлс, С., Суэлс, Д., Ослон, Ф., Стален, Р.Т., 1988.Белая садовая улитка Theba pisana Эффективность выбранной приманки и распыляемых моллюскицидов. J. Agric. Энтомол. 5, 189–197.

Мортон Р.К., 1955. Действие очищенной щелочной фосфатазы на ди- и трифосфопиридиновые нуклеотиды. Biochem. J. 61, 240-244.

Olive, P.L., 1989. Клеточная пролиферация как требование для развития контактного эффекта у сфероидов V79 китайского хомячка. Radiat. Res. 117, 79-92.

Остлинг, О., Йохансон, К.J., 1984. Микроэлектрофоретическое исследование радиационно-индуцированных повреждений ДНК в отдельных клетках млекопитающих. Biochem. Биофиз. Res. Commun. 123, 291-298.

Ovuru, S.S., Mgbere, O.O., 2000. Ферментные изменения креветок (Penaeus notialis) после кратковременного воздействия выветривания сырой нефти Bonny Light. Delta Agric. 7, 62-68.

Radwan, M.A., Essaway, A.E., Abdelmeguied, N.E., Hamed, S.S., Ahmed, A.E., 2008. Биохимические и гистохимические исследования пищеварительной железы улиток Eobania vermiculata, обработанных карбаматными пестицидами.Пестик. Biochem. Physiol. 90, 154–167.

Рахи, С.Ф., Реза, А.М.М., Хоссен, М.С., Хоссейн, З., 2013. Изменения гистопатологических характеристик и активности ацетилхолинэстеразы в головном мозге у жалящего сома Heteropneustes fossilis, подвергшегося воздействию загрязненной речной воды. Int. Акват. Res. 5, 1-18.

Салама А.К., Осман К.А., Сабер Н.А., Солиман А.А., 2005. Окислительный стресс, вызванный различными пестицидами у наземных улиток, Helix aspersa. Пак. J. Biol.Sci. 8, 92-96.

Саманта П., Сандипан П., Мукерджи А.К., Сенапати Т., Гош А. Р., 2014. Влияние гербицида алмикс на метаболические ферменты в различных тканях трех костистых рыб Anabas testudineus, Heteropneustes fossilis и Oreochromis niloticus. Int. J. Sci. Res. Environ. Sci. 2, 156–163.

Shaffi, S.A., 1979. Свинцовая токсичность: биохимический и физиологический дисбаланс в девяти костистых рыбах пресной воды. Toxicol. Lett. 4, 155–161.

Сингх, Н.П., Маккой, М.Т., Тайс, Р.Р., Шнайдер, Э.Л., 1988. Простой метод количественного определения низких уровней повреждения ДНК в отдельных клетках. Exp. Cell Res. 175, 184–189.

Smulders, C.J.G.M., Bueters, T.J.H., van Kleef, R.G.D.M., Vijver-berg, H.P.M., 2003. Избирательные эффекты карбаматных пестицидов на никотиновые ацетилхолиновые рецепторы нейронов крыс и ацетилхолинэстеразу мозга крысы. Toxicol. Прил. Pharmacol. 193, 139-146.

Сонг, М.Ф., Ли, Ю.С., Касаи, Х., Kawai, K., 2012. Микроядра, индуцированные металлическими наночастицами, и окислительное повреждение ДНК у мышей. J. Clin. Biochem. Nutr. 50, 211-216.

Steinert, S.A., 1996. Вклад апоптоза в наблюдаемое повреждение ДНК в клетках мидий. Mar. Environ. Res. 42, 253-259.

Сунь, X.Y., Джин, Ю.Т., Ву, Б., Ван, В.К., Панг, X.L., Ван, Дж., 2010. Исследование генотоксичности алдикарба и метомила. Хуан. Цзин. Ke. Сюэ. 31, 2973–2980.

Удрою, И., 2006. Микроядерный тест в эритроцитах рыб. Акват. Toxicol. 79, 201-204.

Umminger, B.L., 1977. Связь концентрации сахара в цельной крови у беспозвоночных со стандартной скоростью метаболизма. Комп. Biochem. Physiol. 55, 457-460.

Varo, I., Amat, F., Navarro, J.C., 2008. Острая токсичность дихлофоса для Aphanius iberus (Cuvier & Valenciennes, 1846) и его антихолинэстеразное действие на этот вид. Акват. Toxicol. 88, 53-61.

Вассер, П., Боннар, М., 2014. Экогенотоксикология дождевых червей: обзор. Curr. Zool. 60, 255-272.

Venier, P., Zampieron, C., 2005. Доказательства генетического повреждения бычков и мидий из Венецианской лагуны. Environ. Int. 31, 10531064.

Vincent-Hubert, F., Arini, A., Gourlay-France, C., 2011. Ранние генотоксические эффекты на жаберные клетки и гемоциты Dreissena polymorpha, подвергнутые воздействию кадмия, B [a] P и комбинации B [a] P и Cd. Мутат. Res. 723, 26-35.

Wang, W., Wu, X., Liu, Z., Zheng, H., Cheng, Y., 2014. Понимание гепатопанкреатических функций для пищевого метаболизма и развития яичников краба Portunus trituberculatus: открытие гена в сравнительном транскриптоме различных стадий гепатопанкреаса. Plos One 9, e84921.

Xuereb, B., Chaumot, A., Mons, R., Garric, J., Geffard, O., 2009. Активность ацетилхолинэстеразы в Gammarus fossarum (Crustacea Amphipoda): внутренняя изменчивость, контрольные уровни и надежный инструмент для полевых исследований. опросы.Акват. Toxicol. 93, 225-233.

Юсеф, Х.Н., 2011. Физиологические изменения у коричневой садовой улитки Eobania vermiculata, вызванные сублетальными дозами двух ботанических моллюскицидов. J. Egypt. Ger. Soc. Zool. 63, 375-397.

Achatina Fulica — Познакомьтесь с наукой и экспертами

Ахатина Фулика

Эксперты, указанные ниже, выбраны из списка из 276 экспертов по всему миру, оцененных платформой ideXlab

И.Г. Рао — один из лучших специалистов по этой теме на платформе ideXlab.

• Влияние одиночных и бинарных комбинаций моллюскицидов растительного происхождения на различные ферментативные активности в нервной ткани

  Achatina Fulica .

  Журнал прикладной токсикологии: JAT, 2003

  Соавторы: И.Г. Рао, Амрита Сингх, В. К. Сингх, Дхирендра Сингх

  Абстрактный:

  Влияние однократной и бинарной обработки моллюскицидами растительного происхождения на различные ферменты — ацетилхолинэстеразу (AChE), лактодегидрогеназу (LDH) и кислотную / щелочную фосфатазу (ACP / ALP) — в нервной ткани вредоносной наземной улитки Achatina Fulica были изучены.Сублетальное воздействие in vivo на 24 часа с 40% и 80% LC (50) масла Azadirachta indica, масла Cedrus deodara, порошка луковиц Allium sativum, порошка коры Nerium indicum и бинарных комбинаций A. sativum (AS) + C. deodara ( CD) и CD + масла A. indica (AI) значительно изменили активность этих ферментов в нервной ткани Achatina Fulica . Бинарное лечение AS + CD было более эффективным против AChE, LDH и ALP, чем одиночное. Однако бинарное лечение AI + CD было более эффективным против ALP.

• Токсический эффект однократной и бинарной обработки синтетическими моллюскицидами и моллюскицидами растительного происхождения против

  Achatina Fulica .

  Журнал прикладной токсикологии: JAT, 2002

  Соавторы: И. Г. Рао, Д. К. Сингх

  Абстрактный:

  Токсический эффект однократной и двойной обработки синтетическими моллюскицидами и моллюскицидами растительного происхождения был изучен против вредной наземной улитки Achatina Fulica .При однократной обработке синтетические моллюскициды Snail Kill и циперметрин были сильнодействующими, тогда как масло Cedrus deodara было более токсичным среди моллюскицидов растительного происхождения против A. Fulica . При бинарном лечении комбинация Cedrusdeodara + Alliumsativum была более токсичной. Токсичность этих однократных и двойных обработок синтетических моллюскицидов и моллюскицидов растительного происхождения зависела от дозы и времени.

Д.К. Сингх — один из лучших специалистов по данной тематике на платформе ideXlab.

• Токсический эффект однократной и бинарной обработки синтетическими моллюскицидами и моллюскицидами растительного происхождения против

  Achatina Fulica .

  Журнал прикладной токсикологии: JAT, 2002

  Соавторы: И.Г. Рао, Д. К. Сингх

  Абстрактный:

  Токсический эффект однократной и двойной обработки синтетическими моллюскицидами и моллюскицидами растительного происхождения был изучен против вредной наземной улитки Achatina Fulica . При однократной обработке синтетические моллюскициды Snail Kill и циперметрин были сильнодействующими, тогда как масло Cedrus deodara было более токсичным среди моллюскицидов растительного происхождения против A. Фулика . При бинарном лечении комбинация Cedrusdeodara + Alliumsativum была более токсичной. Токсичность этих однократных и двойных обработок синтетических моллюскицидов и моллюскицидов растительного происхождения зависела от дозы и времени.

Хироюки Минаката — один из лучших специалистов по данной тематике на платформе ideXlab.

• Фулицин регулирует женские репродуктивные органы улитки,

  Achatina Fulica .

  Пептиды, 2000

  Соавторы: Юко Фудзисава, Кацуёси Масуда, Хироюки Минаката

  Абстрактный:

  Abstract Фулицин представляет собой нейропептид, содержащий d-аминокислоту, который, как считается, контролирует копулятивное поведение самцов наземной улитки, Achatina Fulica .В настоящем исследовании мы продемонстрировали, что влагалище и яйцевод Achatina плотно иннервируются фалицин-подобными иммунореактивными нейрональными волокнами. Мы подтвердили, что фулицин действительно присутствовал во влагалище, с помощью масс-спектрометрии. Кроме того, фулицин оказывал сильное возбуждающее действие на сокращения влагалища и яйцевода. Эти результаты предполагают, что фулицин контролирует откладывание яиц самками как возбуждающий нейропептид, регулирующий репродуктивные органы самок улитки.

• фулицин — новый нейропептид, содержащий d-аминокислотный остаток, выделенный из ганглиев

  Achatina Fulica

  Сообщения о биохимических и биофизических исследованиях, 1991

  Соавторы: Нориюки Охта, Хироюки Минаката, Кёсукэ Номото, Ичиро Кубота, Ёдзиро Мунэока, Тошифуми Такао, Ясуцугу Симониси, Ёсими Ясудакаматани, Макото Кобаяси

  Абстрактный:

  Abstract Новый пентапептид, содержащий остаток D-аминокислоты, был очищен из центральных ганглиев африканской гигантской улитки Achatina Fulica Ferussac и назван фулицином.Было установлено, что первичная структура пептида представляет собой Phe-d-Asn-Glu-Phe-Val-Nh3. Фулицин усиливал тетаническое сокращение мышцы-ретрактора полового члена этой улитки при очень низких концентрациях, а также проявлял модулирующее действие на активность щечных и желудочковых мышц и нейронов центрального ганглия.

• APGW-амид как ингибирующий нейромедиатор

  Achatina Fulica Ferussac.

  Сообщения о биохимических и биофизических исследованиях, 1991

  Соавторы: Го Цзюнь Лю, Дивина Э. Сантос, Хироши Такеучи, Йошими Каматани, Хироюки Минаката, Киосуке Номото, Ичиро Кубота, Тецуя Икеда, Ёдзиро Мунеока

  Абстрактный:

  Абстрактный APGWamide (L-Ala-L-Pro-Gly-L-Trp-Nh3) был очищен из ганглиев африканского гигантского snall ( Achatina Fulica Ferussac).Этот пептид ингибировал (гиперполяризовал) более половины протестированных типов нейронов Achatina . Это произвело выходящий ток с увеличением проводимости мембраны RAPN (правый передний паллиальный нейрон) под зажимом напряжения. ED50 пептида составляла 6,2 × 10-6 М (95% доверительный интервал: 5,0-7,8 × 10-6 М), а Emax составлял 3,9 ± 0,2 нА. Эффект был обусловлен увеличением проницаемости мембраны до K +. Пептид предложен в качестве тормозного нейромедиатора нейронов Achatina .

De Oliveira Fc — Один из лучших экспертов по этой теме на платформе ideXlab.

• Achatina Fulica Bowdich (1822) новый хозяин вида Cryptosporidium (Apicomplexa, Cryptosporidiidae)

  Revista brasileira de parasitologia veterinaria = Бразильский журнал ветеринарной паразитологии: Orgao Oficial do Colegio Brasileiro de Parasitologia, 2008

  Соавторы: Франсимар Фернандес Гомес, Николь Бранд Эдерли, De Oliveira Fc

  Абстрактный:

  С целью изолировать Cryptosporidium spp.в Achatina Fulica s фекалии, 50 моллюсков были собраны в девяти кварталах муниципалитета Кампус-дус-Гойтаказес, RJ для наблюдения ооцист в фекалиях. Улиток помещали в отдельные контейнеры и кормили водой и зелеными овощами ad libitum до тех пор, пока не набралось грамм фекалий на животное. Образцы кондиционировали в пробирках с 10% -ным формалином, а позже были сделаны мазки фекалий и окрашены по модифицированной методике Цихля-Нильсена. Из 50 исследованных образцов 26 (52%) были положительными на наличие ооцист Cryptosporidium spp.Морфология и морфометрия ооцист показали большую морфологическую изменчивость. Учитывая полученные результаты, моллюск Achatina Fulica является хозяином вида Cryptosporidium и может участвовать в эпидемической цепочке криптоспоридиоза.

Kedokteran Gigi — Один из лучших специалистов по данной тематике на платформе ideXlab.

• Антимикробные протеины слизи улитки (

  Achatina Fulica ) против Streptococcus mutans и Aggregatibacter actinomycetemcomitans Антимикробные протеины слизи улитки ( Achatina Fulica ) против Streptococcus mutans и

  2014

  Соавторы: Досен Факултас, Кедоктеран Гиги

  Абстрактный:

  Предпосылки: Ахазин и митимацин-AF представляют собой белки слизи улитки ( Achatina Fulica ), которые обладают антимикробной активностью.Предполагается, что слизь улитки содержит другие белки, обладающие противомикробной активностью в отношении Streptococcus mutans и Aggregatibacter actinomycetemcomitans, патологических бактерий полости рта. Цель: исследование было направлено на характеристику белков слизи улитки ( Achatina Fulica ), обладающих антимикробной активностью в отношении Streptococcus mutans и Actinobacillus actinomycetemcomitans, а также сравнение антимикробного действия ахазина и митимацина-AF. Методы. Образцом исследования служила слизь улиток, взятых из провинции Джокьякарта.Выделение и характеристика белка проводились с использованием метода SDS-PAGE, электроэлюции и диализа. Для определения концентрации белка был проведен нано-капельный тест. Тест на чувствительность проводился с использованием теста на разбавление, за которым следовали спектрофотометрические тесты и тесты диффузии на бумажных дисках. Результаты: исследование показало, что белки, успешно охарактеризованные из слизи улитки ( Achatina Fulica ), были белками с молекулярной массой 83,67 кДа (ахазин), 50.81 кДа, 15 кДа, 11,45 кДа (полная аминокислотная последовательность митимацина-AF) и 9,7 кДа (митимацин-AF). На основании теста на разведение Ахазин обладал лучшими антимикробными свойствами против Streptococcus mutans, тогда как митимацин-AF имел лучшую антимикробную активность против Aggregatibacter actinomycetemcomitans. Но результат теста диффузии на бумажном диске показал, что ахазин обладает антимикробной активностью в отношении Streptococcus mutans и Aggregatibacter actinomycetemcomitans, в то время как митимацин-AF не обладает антимикробной активностью.Заключение: белки с молекулярной массой 50,81 кДа, 15 кДа, 11,45 кДа рассматривались как новые антимикробные белки, выделенные из слизи улитки. Ахазин обладал лучшей антимикробной активностью против Streptococcus mutans, тогда как митимацин-AF обладал лучшей антимикробной активностью против Aggregatibacter actinomycetemcomitans.