Социально-методический центр поддержки СО НКО Московской области

ЧИТАЙТЕ ТАКЖЕ:

От «Черного зеркала» до «Чудотворцев»: 5 лучших сериалов-антологий

Сериалы, которые можно смотреть вечером после тяжелого дня.

6 февраля 2020

Другие «лихие»: 10 четких фильмов о 90-х

Авторитеты в мировом кинематографе.

2 марта 2020

7 фильмов о любви женщины к женщине

«Фаворитка», «Кэрол», «Жизнь Адель» и другие важные фильмы о лесбийской любви.

19 февраля 2019

Лилия Маст Си (Lilium asiatic Must See)

Необыкновенный сорт! Махровые цветки ярко-оранжевого цвета с бордовым крапомю По мере роспуска цвет меняется и лепестки становятся кремового оттенка, созраняя при этом окраску крапа. Азиатские гибриды — самые неприхотливые среди всех групп лилий. Предпочитают хорошо освещенные участки и нейтральные или слабокислые хорошо удобренные почвы. Очень морозостойки. На одном месте без пересадки можно выращивать в течение 3-4 лет. Глубина посадки луковицы зависит от её величины и обычно равна 3 диаметрам луковицы. Лилии, как и все луковичные растения, не переносят внесения свежей органики и изобилия азотных удобрений, а также застоя влаги. В сентябре, когда листья начинают желтеть, стебли обрезают на уровне почвы. Лилия Маст Си с доставкой по Москве и в любой субъект федерации!

Дик Маст, 70 лет, в долгой карьере все еще есть хмель

Дик Маст примет участие в турнире PGA Tour Champions на этой неделе в Нью-Йорке в качестве 70-летнего квалификационного игрока.

С любезного разрешения Джейкоба Маста

Назовите его кроликом или подмастерьем, на каком бы родном языке вы ни считали себя уместным, но карьеру Дика Маста в гольфе определенно можно назвать долговечной и достойной восхищения.

На этой неделе на стоянке чемпионов PGA Tour Champions в северной части штата Нью-Йорк на Dick’s Sporting Goods Open, Маст будет самым старым участником в возрасте 70 лет, когда поле начнет свое мероприятие с 54 лунками в пятницу в гольф-клубе En-Joie.Его квалификационное достижение ранее на этой неделе, бросок на 5 ударов младше своего возраста (65) во вторник, привлек внимание всего мира гольфа, что может быть просто преамбулой к еще более знаменательному уик-энду.

«Пару лет назад я бы сказал, что если бы я превышал свой возраст каждый день, я бы выигрывал турнир», — сказал Маст в среду вечером, отметив, что он не следит за своими возрастными отметками. «Я думаю, это больше не применимо. Думаю, мне нужно спуститься ниже.

Маст сравнил свое жизненное положение с положением Фила Микельсона после победы 50-летнего Левти на чемпионате PGA в мае.

«Фил вдохновил 40-летних этой победой, — сказал Маст. «Думаю, я хочу вдохновить 60-летних».

Гольф-карьера Маста началась еще до того, как на свет появился весь текущий список игроков PGA Tour и многие новички, которые взрослеют в возрастной группе от 50 лет и старше. После совместной игры в младшем колледже Санкт-Петербурга (Флорида), многократного чемпиона страны (эта программа сейчас не существует) и получения диплома о бизнесе в 1971 году, Маст стал профессионалом в 1972 году в возрасте 21 года.

Два года спустя он впервые стартовал в рамках PGA Tour — «Я никогда раньше не видел соревнований или курсов PGA Tour», — сказал он, — в 1974 году на Andy Williams-San Diego Open Invitational под именем «Ричард Маст». Он пробил в дебют 66 и закончил с ничьей на 16-м месте. Это принесло чек на 2465 долларов. 47 лет назад никто на этом поле не играл, в том числе победители Бобби Николс, Бен Креншоу, Том Кайт, Том Уотсон, Рэймонд Флойд и Гэри МакКорд — по крайней мере, на постоянной основе.

С тех пор, как Mast дебютировал, он нашел себе место для выступления, будь то турнир PGA или чемпионат.В Korn Ferry Tour он заработал свои единственные четыре победы, спонсируемые PGA Tour, три из которых — в первом сезоне 1990 года, когда он назывался Ben Hogan Tour и когда Хоган был еще жив. Он также является легендой мини-туров по Флориде, выиграв десятки соревнований за десятилетия. В общей сложности в турах, связанных с PGA Tour, Маст собрал 653 старта и чуть больше 4 миллионов долларов дохода. Он был в паре с обоими сторонами спектра — от Билли Каспера до Патрика Рида. Он был в тех же группах, когда Дэвис Лав III, Джастин Леонард, Стюарт Синк и Исао Аоки начали свой первый карьерный тур.

Несмотря на то, что PGA Tour не отслеживает рекорды квалификационных недель, Маст там был нечетким пятном. Перед поездкой на все льготы он бегал среди так называемых кроликов, каждую неделю собираясь участвовать в мероприятиях. В 2005 году он в понедельник прошел квалификацию на Hawaiian Open, пробил во втором раунде 64, срезал и занял 47-е место. В тот воскресный вечер он совершил эффект красных глаз, вылетел в Сан-Диего и в понедельник квалифицировался на то, что тогда называлось Buick Invitational — в возрасте 54 лет. Он сделал тот же дубль в возрасте 59 лет в 2010 году, успешно попав в понедельник для участия в мероприятиях в The Greenbrier. и Turning Stone в августе того же года.

Так в чем же секрет такой прочности? Маст всегда был сторонником здорового образа жизни и, во-первых, уделял особое внимание религии. Сегодня он дисциплинирован с ежедневной растяжкой по утрам и вечерам и употреблением порошковых напитков для поддержания своих круговоротов. Маст даже рекомендует использовать возвратное название с использованием тренажерного зала Chuck Norris Total Gym — конечно, без всяких приставаний к плохим парням.

Революционная процедура, возможно, была ключевой в последние годы. Страдая от проблем со спиной в середине 2010-х, он подумывал повесить свои мягкие шипы.Но затем он попробовал плазму, обогащенную тромбоцитами (PRP) в течение 5 месяцев, и в сочетании со своим обычным режимом фитнеса был воодушевлен. Инъекции концентрации собственных тромбоцитов Маста ускоряли процесс заживления.

«Это было потрясающее преобразование, — сказал Маст. «Мне все еще нравится сильно бить мячом, и это помогло».

Пару недель назад второй младший сын Маста, Джейкоб, теперь его инструктор и начальник в гольф-клубе Poplar Grove в Амхерсте, штат Вирджиния, проверял качели своего отца на измерительном приборе.Главный профессионал в Poplar Grove сказал ведущему инструктору по гольфу, что Маст пролетел на своих драйверах 280 ярдов, а 5-айроны — 200 ярдов — поразительные цифры для 70-летнего человека, который мечтал о такой длине 50 лет назад. Работа, которую эти двое проделали, чтобы Маст оставался подвижным, продлила его карьеру в условиях западной Вирджинии, где в непосредственной близости находятся пять из шести сыновей Маста и 14 внуков. Шестой сын, Джошуа, бывший кэдди отца, в настоящее время работает главным прокурором и прокурором в морской пехоте в Кэмп-Лежен, штат Северная Каролина.C.

«Джейкоб исследует все типы вещей, которые помогают мне развиваться, создают больше рычагов воздействия и интеллектуальные аспекты игры», — сказал Маст. «Это была отличная команда».

Пожалуй, самым большим атрибутом Мастера является конкурентный огонь. Он старается изо всех сил, когда играет в паре с игроками в шатер, и говорит, что «швырял мяч для пинг-понга в живот моей матери, чтобы получить выигрышное очко». Он получает этот драйв от своего отца, Кена, клубного профи-левши, которого в родном Огайо Масте прозвали «Шугар Крик Флэш».

«Я все еще думаю, что он хочет что-то доказать самому себе», — сказал Джейкоб. «Он хочет получить одну большую победу. У него все еще есть время, чтобы сделать это.

Есть все признаки успешной недели. Он сыграет в пятницу утром с Клиффом Кресджем и Дэвидом Морландом IV; в 52 года оба на 18 лет моложе Маста. Последним победителем En-Joie в 2019 году перед пандемией COVID-19 стал квалифицированный Дуг Бэррон. Маст участвовал в соревнованиях в 2012 и 2014 годах после квалификации на мероприятие и вошел в тройку лучших 10 на турнире, когда он назывался B.C. Открыть в туре PGA. Кэдди Маста будет Виктор Сиас, который был в его сумке в 2014 году, когда Маст почти выиграл турнир.

«Сейчас я действительно играю хорошо, — сказал Маст. «Самый большой фактор и вопрос может заключаться в том, смогу ли я сделать это один или два дня, но смогу ли я быть на высоте все три дня? Просто вступай в спор и посмотри, как у меня дела. Я занимаюсь этим уже давно ».

Джейкоб Маст (слева) обучал своего отца Дика Маста (справа) последние несколько лет.

Предоставлено Jacob Mast

Дефектное проявление гиперчувствительности замедленного типа у мышей с дефицитом тучных клеток W / Wv и SI / SId

Предыдущие исследования показали, что тучные клетки кожи участвуют в возникновении гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) у мышей.Считается, что тучные клетки необходимы в DTH для высвобождения серотонина, чтобы открыть промежутки между эндотелиальными клетками, позволяя проникать эффекторным клеткам в ткань. Две разные линии мышей с независимыми генетическими дефектами, которые приводят к существенному дефициту тучных клеток (W / Wv и SI / SId), и их нормальные контрольные группы однопометников + / + были изучены на предмет их способности экспрессировать DTH. Было показано, что у обоих штаммов дефицит серотонин-содержащих тучных клеток на участках кожи, вызывающих преимущественное проявление DTH у нормальных мышей, таких как ухо или подушечка стопы.Дефектный DTH был обнаружен в обоих штаммах с дефицитом тучных клеток с использованием двух различных систем: 1) индуцированный эритроцитами барана DTH подушечки стопы и 2) ответные реакции отека уха, вызванные контактной чувствительностью к пикрилхлориду. Эксперименты по адаптивному переносу показали, что аномальный DTH у мышей с дефицитом тучных клеток был вызван скорее дефектом в индукции DTH, чем дефектом индукции эффекторных Т-клеток. В этих экспериментах способность вызывать DTH могла быть передана нормальным мышам + / + с сенсибилизированными клетками от мышей с дефицитом тучных клеток, но сенсибилизированные клетки от + / + мышей не могли передавать DTH-чувствительность мышам с дефицитом тучных клеток.Кроме того, у мышей W / Wv или SI / SId не было обнаружено никаких дефектов количества эпидермальных клеток Лангерганса или функции антигенпрезентирующих клеток. Таким образом, мы пришли к выводу, что аномальное проявление DTH у мышей W / Wv и SI / SId, вероятно, связано с дефицитом у них тучных клеток. Неспособность мышей с дефицитом тучных клеток экспрессировать DTH была преодолена, когда сенсибилизированные Т-клетки и специфический антиген были помещены во внесосудистые ткани путем местного пассивного переноса. Эти результаты предполагают, что высвобождение вазоактивных медиаторов, таких как серотонин, тучными клетками необходимо в DTH, чтобы позволить эффекторным Т-клеткам покинуть внутрисосудистое пространство, проникнуть в ткани и активироваться антигеном для высвобождения хемоаттрактантных лимфокинов, которые привлекают неспецифический инфильтрат воспалительного процесса. клетки.

CAAS

Выберите свою мачту в отношении ваших парусов Производители: AerotechAttitude SailsAvanti SailsBull SailsChallenger sailsDuotoneEzzy SailsF2 SailsGaastraGoya парусаОружие парусаHot парусаKA парусаЛофт-парусаMaui парусаNaishNeilPointSailSailSailSaver SailsСеверные паруса

Nate Mast — мужской баскетбольный тренер

Нейт Маст был назначен первым штатным директором по баскетболу Saluki Basketball 19 мая 2012 года. Он ушел в отставку в июне 2015 года, чтобы продолжить карьеру в частном секторе.

До SIU Маст работал главным тренером в Parkland College в Шампейне, штат Иллинойс, где он установил рекорд 53-44, включая участие в национальном турнире NJCAA Division II в 2012 году.

Выпускник Университета штата Иллинойс в 2002 году, Маст был помощником студента в течение одного сезона в Иллини (2001-02), а затем присоединился к команде Билла Селфа в Канзасе в 2004 году в качестве административного сотрудника.Находясь в Канзасе, Jayhawks выиграли три чемпионата конференции Big 12. В 2007 году Маст принял свою первую тренерскую работу в качестве ассистента в Университете Арканзаса в Форт-Смит, где он помог «Лайонс» установить рекорд 51-13 в течение двух сезонов.

«Опыт Нейта в качестве главного тренера, работа и игра на высшем уровне в баскетболе колледжа будут для нас огромным преимуществом», — сказал Хинсон. «Мы рады приветствовать Нейта, его жену Эшли и его детей, Нолана и Кендалла, в нашей семье Салюки.«

Мастерс, проработавший четыре года в штате Иллинойс, является рекордсменом по количеству прохождений пользовательского интерфейса. Он сыграл в 72 играх с 1997 по 2001 год, в том числе четыре стартовых, и был включен в команду Big Ten Academic All-Conference. Он сыграл три сезона за Лона Крюгера и один сезон за Селф.

«Я рад быть здесь и снова на уровне Дивизиона I», — сказал Маст. «Я с нетерпением жду совместной работы с нашими сотрудниками».

Маст был двукратным обладателем награды Kenny Battle Most Inspirational Player Award, входил в состав трех чемпионских команд Big Ten и помог Иллини добраться до NCAA Elite 8 на старшем курсе.

Маст недавно выпустил на Amazon.com книгу под названием «Иди, получи эту стипендию!: Руководство по подбору студентов в баскетбол для старшеклассников, родителей и спортивных болельщиков».

Уроженец Шампани, Маст был занесен в Зал славы Центральной средней школы в 2008 году. Он женат на бывшей моряке Эшли из Шампейна, и у пары трое детей: Нолан (6 лет), Кендалл (4 года) и Килан (1 год). ).

Венецианская мачта — Галерея искусств Фрир и Артур М.Галерея Саклера

Происхождение

К 1908 г.
Э. Готтшалк, к 1908 г. [1]

С 1908 по 1919 год
Чарльз Ланг Фрир (1854-1919), приобретенный у Э. Готтшалка в 1908 году [2]

С 1920 года
Галерея искусств Фрира, подаренная Чарльзом Лангом Фриром в 1920 году [3]

Примечания:

[1] См. Список покупок Whistler с момента составления Смитсоновской инвентаризации, стр. 7, Галерея искусств Фрир и архивы галереи Артура М. Саклера.Регистрационный номер этого объекта изменен, чтобы соответствовать году его покупки.

[2] См. Примечание 1.

[3] Оригинал дарственной грамоты Чарльза Лэнга Фрира был подписан в 1906 году. Коллекция была получена в 1920 году после завершения строительства Галереи Фрира.

Предыдущий владелец

Э. Готтшалк (источник К.Л. Фрира)
Чарльз Ланг Фрир 1854-1919 гг.

Этикетка

гравюр Уистлера обозначаются цифрами «G», как указано в книге Маргарет Ф.Макдональд, Гришка Петри, Мэг Хаусберг и Джоанна Микок (Университет Глазго, 2012 г.), http://etchings.arts.gla.ac.uk. Это отпечаток G219, состояние 3 из 12.

Опубликованные источники

• Маргарет Ф. Макдональд, Гришка Петри, Мэг Хаусберг, Джоанна Микок. Джеймс Эббот Макнил Уистлер: Офорты, raisonée каталога ., 2012..
• Говард Мэнсфилд. Описательный каталог офортов и сухих игл Джеймса Эббота Макнила Уистлера .Чикаго, 1909. г.
• Кэтрин Лохнан. Офорты Джеймса Макнила Уистлера . Exh. Кот. Нью-Хейвен и Лондон, 1984 г.
• Эдвард Г. Кеннеди. Гравюра Уистлера: иллюстрации коллотипных репродукций различных состояний пластин . 4 тома, Нью-Йорк, 1910.

Зона (а) сбора

Американское искусство

Интернет-ресурсы

Google Cultural Institute

CC0 — Creative Commons (CC0 1.0)

Это изображение находится в общественном достоянии (без ограничений авторских прав). Вы можете копировать, изменять и распространять эту работу, не обращаясь в Смитсоновский институт. Для получения дополнительной информации посетите страницу условий использования Смитсоновского института.

Информация, представленная на этом веб-сайте, может быть изменена и обновлена ​​в любое время по мере проведения текущих исследований или по иным причинам. В ожидании любых таких изменений и обновлений информация на этом сайте может быть неполной или неточной или содержать опечатки.Ни Смитсоновский институт, ни его регенты, должностные лица, сотрудники или агенты не делают никаких заявлений относительно точности, надежности, полноты или своевременности информации на сайте. Используйте этот сайт и информацию, представленную на нем, по своему усмотрению. Галерея искусств Фрира и Галерея Артура М. Саклера приветствуют информацию, которая расширит или прояснит историю владения объектами в их коллекциях.

Это изображение находится в общественном достоянии (без ограничений авторских прав).Вы можете копировать, изменять и распространять эту работу, не обращаясь в Смитсоновский институт. Для получения дополнительной информации посетите страницу условий использования Смитсоновского института.

Существуют ограничения на повторное использование этого образа. Для получения дополнительной информации посетите страницу условий использования Смитсоновского института.

для загрузки

Пользователи Chrome: щелкните значок правой кнопкой мыши и выберите «Сохранить ссылку как… «
пользователи Internet Explorer: щелкните правой кнопкой мыши значок, выберите» сохранить цель как … «
Пользователи Mozilla Firefox: щелкните правой кнопкой мыши значок, выберите» сохранить ссылку как … «

Международная структура взаимодействия изображений

FS-5197_08

Экзосомальный miR-409-3p, секретируемый активированными тучными клетками, способствует миграции микроглии, активации и нейровоспалению, нацеливаясь на Nr4a2 для активации пути NF-κB | Journal of Neuroinflampting

Экзосомы, секретируемые активированными тучными клетками, способствовали миграции, активации и нейровоспалению микроглии.

Сначала экзосомы экстрагировали из супернатантов мышиных культур клеток P815, и их форму наблюдали с помощью ТЕМ.Экзосомы представляли собой везикулы диаметром 40–150 нм с однородной чашеобразной морфологией, а распределение по размерам измеряли с помощью NTA (рис. 1а). Чтобы дополнительно определить, являются ли собранные везикулы экзосомами, репрезентативные маркеры экзосом были обнаружены с помощью вестерн-блоттинга. Как показано на фиг. 1b, в изолированной фракции экзосом наблюдались повышенная экспрессия CD63 и TSG101 и пониженная экспрессия калнексина. Затем мышиные клетки BV-2 культивировали с экзосомами, меченными PKH67. Флуоресцентная микроскопия показала, что экзосомы эффективно поглощаются мышиными клетками BV-2 (рис.1в).

Экзосомы, секретируемые активированными тучными клетками, способствовали миграции микроглии, активации и нейровоспалению. a Экзосомы экстрагировали из супернатантов клеточных культур мышиных клеток P815 (контрольный экзо) или клеток LPS-P815 (LPS exo). Формы и распределение размеров этих экзосом наблюдали с помощью ПЭМ и NTA. Шкала шкалы 100 нм. b Репрезентативные маркеры экзосом были обнаружены с помощью вестерн-блоттинга. c Флуоресцентная микроскопия показала поглощение экзосом, меченных PKH67, мышиными клетками BV-2.Шкала 50 мкм. d Миграцию микроглии мышиного BV-2 оценивали с помощью анализов Transwell. Шкала 10 мкм. E. Иммунофлуоресцентное окрашивание на Iba1 и CD68 использовали для оценки активации микроглии. Шкала 50 мкм. F-I, CD86, IL-1β и воспалительные цитокины (IL-6 и TNF-α) были обнаружены с помощью qRT-PCR и ELISA. Эксперименты на клеточных культурах проводили в трех повторностях. * P <0,05; ** P <0,01; *** P <0,001

Миграция микроглии — одна из патологических характеристик ЦНС после травмы.Мигрирующая активированная микроглия опосредует воспаление через фагоцитоз, презентацию антигена и секрецию факторов [18, 19]. Чтобы исследовать влияние экзосом на миграцию микроглии мышей BV-2, мы выполнили анализ Transwell. Как показано на фиг. 1d, количество мигрирующих клеток в группе экзосом LPS-P815 (экзо LPS) было больше, чем в контрольной группе (контрольная экзо), что позволяет предположить, что экзосомы LPS-P815 ускоряют миграцию микроглии BV-2 мыши.

Иммунофлуоресцентное окрашивание на Iba1 и CD68 использовали для оценки активации микроглии.Примечательно, что экзосомы LPS-P815 индуцировали активацию микроглии BV-2 мыши (рис. 1e). Для дальнейшего изучения влияния экзосом LPS-P815 на активацию микроглии BV-2 мыши были обнаружены CD86, IL-1β, IL-6 и TNF-α. Примечательно, что экзосомы LPS-P815 приводили к увеличению уровней CD86 и IL-1β (рис. 1f, g). Секреция IL-6 и TNF-α была заметно увеличена в группе экзосом LPS-P815 (рис. 1h, i). Эти результаты показали, что экзосомы LPS-P815 способствовали активации микроглии и нейровоспалению.

Активированные тучные клетки доставляли экзосомальную miR-409-3p к мышиной микроглии BV-2

Используя микроматричный анализ, мы обнаружили, что по сравнению с контрольной группой в группе, обработанной LPS, 7 экзосомальных miRNA (mmu-miR-6240, mmu-miR-3069-3p, mmu-miR-5100, mmu-miR-7234-5p, mmu-miR-470-5p, mmu-miR-5619-5p и mmu-miR-409-3p) были активированы, и 14 экзосомальных миРНК (mmu-miR-7647-3p, mmu-miR-6979-3p, mmu-miR-7022-5p, mmu-miR-6973a-5p, mmu-miR-3065-5p, mmu-miR-5709- 3p, mmu-miR-7082-3p, mmu-miR-7221-5p, mmu-miR-532-5p, mmu-miR-6377, mmu-miR-1947-5p, mmu-miR-700-5p, mmu- miR-3109-5p и mmu-miR-499-3p) подавлялись ( P <0.05, FC> 1,5, рис. 2а). Кроме того, с помощью подтверждения qRT-PCR мы обнаружили, что miR-409-3p была увеличена в клетках LPS-P815 и в соответствующих экзосомах (рис. 2b). Затем мы также обнаружили, что miR-409-3p была увеличена в мышиных клетках BV-2, инкубированных с экзосомами LPS-P815 (LPS exo) (рис. 2c).

Активированные тучные клетки доставляли экзосомальную miR-409-3p к мышиным микроглиальным клеткам BV-2. a Microarray анализ ( P <0,05, FC> 1,5) показал, что miR-409-3p была увеличена в экзосомах LPS-P815 (LPS exo: LPS1, LPS2, LPS3; Control exo: control1, control2, control3).b Подтверждение с помощью qRT-PCR показало, что уровни miR-409-3p были увеличены в клетках LPS-P815 и в соответствующих экзосомах. c Мышиные клетки BV-2 инкубировали с контрольными экзосомами (контрольные экзо) или экзосомами LPS-P815 (LPS экзо). Уровни miR-409-3p в двух группах определяли с помощью qRT-PCR. d Мышиные клетки P815 трансфицировали имитатором miR-409-3p или имитатором NC. Уровни miR-409-3p в клетках и экзосомах определяли с помощью qRT-PCR. e Мышиные клетки BV-2 инкубировали с группой миметиков P815-miR-409-3p NC-экзосом (имитирует NC экзо) или группой P815-miR-409-3p миметиков экзосом (имитирует экзо).Уровни miR-409-3p определяли с помощью qRT-PCR. F, мышиные клетки P815 трансфецировали Cy3-меченной miR-409-3p, и экзосомы выделяли из супернатантов культур мышиных клеток P815. Выделенные экзосомы метили PKH67 и затем инкубировали с мышиными клетками BV-2. G, флуоресцентная микроскопия показала, что miR-409-3p может эффективно поглощаться мышиными клетками BV-2 через экзосомы. Шкала 50 мкм. Эксперименты на клеточных культурах проводили в трех повторностях. * P <0,05; ** P <0.01; *** P <0,001

Более того, как показано на рис. 2d, miR-409-3p увеличилась в 7 раз, а экзосомальная miR-409-3p увеличилась в 4 раза в группе мимиков по сравнению с мимическими NC. группа. Более того, повышенный уровень miR-409-3p наблюдался в мышиных клетках BV-2, культивируемых с экзосомами, имитирующими P815-miR-409-3p (имитирующими экзо) (фиг. 2e). Кроме того, мышиные клетки P815 трансфицировали Cy3-меченной miR-409-3p, и экзосомы выделяли из супернатантов мышиных культур клеток P815.Выделенные экзосомы метили PKH67 и затем инкубировали с мышиными клетками BV-2 (фиг. 2f). Флуоресцентная микроскопия показала, что miR-409-3p может эффективно поглощаться мышиными клетками BV-2 через экзосомы (рис. 2g).

Повышенная регуляция miR-409-3p способствовала миграции, активации и нейровоспалению микроглии

Чтобы сделать эффект повышенного miR-409-3p на мышиные клетки BV-2 более значительным, мы трансфицировали миметики miR-409-3p в мышиный BV-2. клетки для моделирования доставки экзосомальной miR-409-3p, секретируемой активированными мышиными клетками P815 (рис.3а). Анализы Transwell выявили повышенное количество мигрирующих клеток в мимической группе miR-409-3p по сравнению с таковой в мимической группе NC (фиг. 3b).

MiR-409-3p стимулировал миграцию, активацию и нейровоспаление мышиного BV-2 микроглии. a Мышиные клетки BV-2 трансфицировали имитатором miR-409-3p NC или имитатором miR-409-3p. Уровни miR-409-3p определяли с помощью qRT-PCR. b Миграционную способность мышиных клеток BV-2 измеряли с помощью анализа Transwell.Шкала 10 мкм. c Иммунофлуоресцентное окрашивание на Iba1 и CD68 использовали для оценки активации микроглии BV-2 мыши. Шкала 50 мкм. d — g CD86, IL-1β и воспалительные цитокины (IL-6, TNF-α) были обнаружены с помощью qRT-PCR и ELISA. Эксперименты на клеточных культурах проводили в трех повторностях. * P <0,05; ** P <0,01; *** P <0,001

Как показано на фиг. 3c, miR-409-3p может индуцировать активацию микроглии BV-2 мыши.Как и ожидалось, miR-409-3p увеличивал экспрессию CD86 и IL-1β (фиг. 3d, e). Более того, продукция провоспалительных цитокинов (IL-6 и TNF-α) также увеличивалась в группе миметиков (рис. 3f, g). Таким образом, эти находки продемонстрировали, что miR-409-3p способствует миграции, активации и нейровоспалению микроглии.

miR-409-3p действовал как про-нейровоспалительная молекула, направляя Nr4a2 для активации пути NF-κB

Чтобы идентифицировать гены-кандидаты-мишени miR-409-3p, мы собрали и пересекли результаты трех программ прогнозирования. (TargetScan, miRWalk и microT).Из 30 пересекающихся генов 3′-UTR Nr4a2 связывается с miR-409-3p с высокой оценкой и высокой консервативностью (рис. 4a). Важно отметить, что член 2 группы A подсемейства 4 ядерных рецепторов (Nr4a2), также известный как связанный с ядерным рецептором белок 1 (Nurr1), сильно экспрессируется в гиппокампе, черной субстанции, височной коре и субикулуме [20, 21]. Nr4a2 способствует когнитивным функциям, опосредуя нейрогенез в гиппокампе, и является терапевтической мишенью для лечения нейровоспаления [22, 23].Briana et al. идентифицировали Nr4a2 как супрессор пути ядерного фактора kB (NF-κB) в мышиной микроглии BV-2 [24].

miR-409-3p действовал как провоспалительная молекула, нацеливаясь на Nr4a2 для активации пути NF-κB. a Пересекающиеся выходные данные трех программ прогнозирования (TargetScan, miRWalk и microT) включали 30 потенциальных генов-мишеней. Из этих генов 3′-UTR Nr4a2 связывается с miR-409-3p с высокой оценкой и высокой консервативностью. b 3′-UTRs с Nr4a2 дикого типа (WT) или мутантными (Mut) связывающими последовательностями. Анализ люциферазного репортера показал, что Nr4a2 был прямой мишенью для miR-409-3p. c Уровни экспрессии белков Nr4a2 и NF-κB / p65 определяли с помощью вестерн-блоттинга. d Мышиные клетки BV-2 котрансфицировали миметиками miR-409-3p и Lv-Nr4a2 (миметики + Lv-Nr4a2). Эффективность трансфекции и соответствующие изменения в экспрессии NF-κB / p65 также определялись с помощью вестерн-блоттинга.E. Миграционную способность мышиных клеток BV-2 измеряли с помощью анализа Transwell. Шкала 10 мкм. F-G. Уровни IL-6 и TNF-α исследовали с помощью ELISA. Эксперименты на клеточных культурах проводили в трех повторностях. * P <0,05; ** P <0,01; *** P <0,001

Таким образом, с помощью анализа репортера люциферазы мы обнаружили снижение интенсивности люциферазы в группах миметика miR-409-3p и Nr4a2-WT по сравнению с контрольными группами, что указывает на то, что Nr4a2 был прямая мишень miR-409-3p (рис.4б). Более того, анализ вестерн-блоттинга показал, что высокие уровни miR-409-3p подавляют экспрессию белка Nr4a2 и повышают экспрессию белка NF-κB (рис. 4c).

Кроме того, мы котрансфицировали миметики miR-409-3p и Lv-Nr4a2 в мышиные клетки BV-2, чтобы оценить, зависит ли регуляторный эффект miR-409-3p от Nr4a2. Эффективность трансфекции и соответствующие изменения в экспрессии NF-κB / p65 показаны на фиг. 4d. Анализы Transwell показали, что количество мигрирующих клеток в группах миметиков miR-409-3p и Lv-Nr4a2 (миметики + Lv-Nr4a2) было частично снижено по сравнению с таковым в контрольных группах (рис.4д). Точно так же уровни IL-6 и TNF-α были явно уменьшены (фиг. 4f, g).

В целом, эти данные подтверждают точку зрения, что miR-409-3p действует как провоспалительная молекула, нацеливаясь на Nr4a2, чтобы активировать путь NF-κB.

Опосредованный экзосомами перенос miR-409-3p способствует миграции микроглии, активации и нейровоспалению.

Для дальнейшего подтверждения роли опосредованного экзосомами транспорта miR-409-3p в мышиную микроглию BV-2 мы провели эксперимент по спасению.После трансфекции мышиных клеток P815 ингибитором miR-409-3p или ингибитором NC все клетки обрабатывали LPS. По сравнению с контрольными группами мышиные клетки P815, трансфицированные ингибитором miR-409-3p и обработанные LPS, показали пониженные уровни miR-409-3p как в клетках, так и в экзосомах (фиг. 5a, b). Затем мышиные клетки BV-2 культивировали с соответствующими экзосомами, экстрагированными из этих трех групп. Подобно результатам, описанным выше, относительный уровень miR-409-3p был снижен в мышиных клетках BV-2, культивированных с экзосомами LPS + ингибитор (LPS + ингибитор exo) (рис.5в). Как показано на фиг. 5d, e, как миграция, так и активация мышиной микроглии BV-2 были снижены в группе экзосом LPS + ингибитора по сравнению с контрольными группами. Уровни IL-6 и TNF-α также явно снижались в группе экзосом LPS + ингибитора (фиг. 5f, g). Кроме того, вестерн-блоттинг показал повышенную регуляцию Nr4a2 и пониженную регуляцию уровня белка NF-κB в группе экзосом LPS + ингибитора (фиг. 5h).

Опосредованный экзосомами перенос miR-409-3p способствовал миграции микроглии, активации и нейровоспалению. a , b После трансфекции мышиных клеток P815 ингибитором miR-409-3p или ингибитором NC все клетки обрабатывали LPS. Относительные уровни miR-409-3p как в клетках, так и в экзосомах определяли с помощью qRT-PCR. c Мышиные клетки BV-2 культивировали с соответствующими экзосомами, экстрагированными из этих трех групп (экзо LPS, экзо LPS + ингибитор NC, экзо LPS + ингибитор). Относительные уровни miR-409-3p в мышиных клетках BV-2 определяли с помощью qRT-PCR. d Миграцию мышиной микроглии BV-2 тестировали с помощью анализа Transwell.Шкала 10 мкм. и Иммунофлуоресцентное окрашивание на Iba1 и CD68 использовали для оценки активации микроглии BV-2 мыши. Шкала 50 мкм. f , g Уровни IL-6 и TNF-α исследовали с помощью ELISA. Н. Уровни экспрессии белков Nr4a2 и NF-κB / p65 определяли с помощью вестерн-блоттинга. Эксперименты на клеточных культурах проводили в трех повторностях. * P <0,05; ** P <0,01; *** P <0,001

Экзосомы, секретируемые тучными клетками, богатыми miR-409-3p, способствовали активации микроглии

Наконец, in vivo, PBS, P815-miR-409-3p имитирует NC-экзосомы (имитирует NC exo) и имитирующие экзосомы P815-miR-409-3p (имитирующие экзо) вводили мышам C57BL / 6 путем инъекции в хвостовую вену.Iba1 использовали для обнаружения микроглии, а CD68 использовали для обнаружения активации микроглии. Через 3 дня с помощью иммунофлуоресцентного анализа мы обнаружили, что по сравнению с группой PBS и имитирующей экзогруппой NC, имитирующая экзогруппа проявляла повышенную активацию микроглии (фиг. 6a). Более того, вестерн-блоттинг показал, что в имитирующей экзогруппе наблюдались пониженные уровни Nr4a2 и повышенные уровни NF-κB / p65 (фиг. 6b). Эти результаты первоначально продемонстрировали, что происходящий из тучных клеток miR-409-3p может вызывать активацию микроглии.

Экзосомы, секретируемые тучными клетками, богатыми miR-409-3p, способствовали активации микроглии. , Iba1 и CD68 использовали для обнаружения активации микроглии. Иммунофлуоресцентные анализы использовались для измерения уровней Iba1 и CD68 в гиппокампе в группе PBS, P815-miR-409-3p имитирует группу NC-экзосом (имитирует NC-экзо) и P815-miR-409-3p имитирует группу экзосом (имитирует экзо). Шкала 50 мкм. b Вестерн-блоттинг использовали для обнаружения экспрессии белков Nr4a2 и NF-κB / p65. n = 5 мышей C57BL / 6 на группу

Anti-MIST, ID (CLNK, MIST, цитокин-зависимый линкер кроветворных клеток, иммунорецептор тучных клеток si | United States Biological

Информация о продукте «Anti-MIST, ID (CLNK , MIST, цитокин-зависимый линкер гемопоэтических клеток, иммунорецептор тучных клеток si «

MIST является членом семейства адаптеров SLP76 (см. LCP2, MIM 601603, BLNK, MIM 604515). MIST играет роль в регуляции передачи сигналов иммунорецептора , включая PLC-гамма (PLCG1, MIM 172420) -опосредованную передачу сигналов рецептора B-клеточного антигена (BCR) и опосредованную FC-эпсилон R1 (см. FCER1A, MIM 147140) дегрануляцию тучных клеток (Cao et al., 1999 [PubMed 10562326], Goitsuka et al., 2000, 2001 [PubMed 10744659] [PubMed 11463797]). Применения: Подходит для использования в Вестерн-блоте, ELISA, Рекомендуемое разведение: ELISA: 1: 1000, Вестерн-блот: 1: 100-500, Хранение и стабильность: Может храниться при 4 ° C в течение короткого времени Только. Аликвоты, чтобы избежать повторного замораживания и оттаивания. Хранить при -20 ° C. Аликвоты стабильны в течение 12 месяцев. Для максимального извлечения продукта центрифугируйте исходный флакон после размораживания и перед снятием крышки.

Свойства